技術(shù)平臺:
以TurboID技術(shù)平臺為例,該技術(shù)平臺在目的蛋白末端融合了突變型生物素連接酶。在過表達細胞中,加入生物素刺激,在10min之內(nèi),即可迅速對目的蛋白的相互作用蛋白進行生物素化標記。這一標記過程不僅速度快,背景低,甚至在室溫條件下也能順利進行。因此,TurboID技術(shù)平臺極大地拓展了其應(yīng)用范圍,不僅適用于哺乳動物細胞體系,還可應(yīng)用于植物、昆蟲等多種生物體系。隨后,通過分離富集生物素標記的蛋白質(zhì)并進行酶切處理,可以輕松獲得肽段樣品,進而用于質(zhì)譜分析,從而深入研究蛋白質(zhì)的相互作用及其功能。
服務(wù)內(nèi)容:
技術(shù)優(yōu)勢:
① 催化效率高。
② 不會對活細胞造成損害。
③ 較高的生物素化效率和穩(wěn)定性。
④ 可以在室溫(25°C)下實現(xiàn)有效的生物素化。
應(yīng)用案例:
項目需求:分析給藥處理前后,細胞中與目的蛋白(POI)相互作用蛋白組的變化。
解決方案:利用鄰近標記策略,構(gòu)建POI-TurboID表達載體,在細胞中過表達,分別設(shè)置給藥組與空白組,生物素化標記。將細胞中蛋白組進行富集后,定性與定量分析生物素化蛋白的差異,以表征POI相互作用蛋白組的變化。
數(shù)據(jù)展示: