創(chuàng)新藥物靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)Innovative drug target discovery
背景介紹：
半胱氨酸的巰基因其顯著的反應(yīng)活性，在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能中扮演著關(guān)鍵角色。作為親核試劑、氧化還原催化中心、金屬離子配體以及變構(gòu)效應(yīng)的關(guān)鍵位點(diǎn)，它廣泛參與并深刻影響蛋白質(zhì)的活性和調(diào)控機(jī)制。值得注意的是，半胱氨酸殘基易于經(jīng)歷多種類型的翻譯后修飾過程，這些修飾不僅能夠精密調(diào)節(jié)蛋白的功能屬性，也可能導(dǎo)致其功能受損。鑒于此類修飾與人類眾多重大疾病的緊密關(guān)聯(lián)性，對蛋白質(zhì)中半胱氨酸上翻譯后修飾組進(jìn)行定性和定量分析具有至關(guān)重要的意義。這對于深入解析相關(guān)蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能及其在健康和疾病狀態(tài)下的作用機(jī)理，具有不可或缺的價(jià)值。
科絡(luò)思生物在例如半胱氨酸過硫化修飾的鑒定上有著豐富的經(jīng)驗(yàn)，創(chuàng)新地利用半胱氨酸通用型探針依據(jù)-SH及-SSH pKa的差異，通過調(diào)節(jié)pH，降低了大量-SH背景干擾，讓探針更多地標(biāo)記-SSH，從而實(shí)現(xiàn)對巰基化位點(diǎn)的有效鑒定。
科絡(luò)思生物具備先進(jìn)的質(zhì)譜技術(shù)，能夠直接且精確地解析多種類型的蛋白質(zhì)翻譯后修飾及其發(fā)生的具體位點(diǎn)。通過巧妙結(jié)合分離富集技術(shù)和同位素標(biāo)記等先進(jìn)手段，可以實(shí)現(xiàn)對各類修飾的大規(guī)模、高通量定性和定量分析，為深入研究蛋白質(zhì)翻譯后修飾提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。
技術(shù)平臺：
我們的優(yōu)勢：
1.專業(yè)技術(shù)優(yōu)勢：團(tuán)隊(duì)經(jīng)驗(yàn)豐富，頂級期刊發(fā)表，提供業(yè)界權(quán)威技術(shù)服務(wù)，個性化方案，保障最佳實(shí)驗(yàn)效果。
2.嚴(yán)謹(jǐn)質(zhì)量管理：成熟質(zhì)量管理體系，遵循ISO9001標(biāo)準(zhǔn)，確保報(bào)告真實(shí)可信。
3.一站式服務(wù)：覆蓋探針設(shè)計(jì)、合成、靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)、生信分析全流程，咨詢到交付一站式，及時(shí)反饋進(jìn)度，保證客戶滿意度。
4.高性能設(shè)備:配備Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480、Thermo Flsher Q Exactlve HF-X、Bruker timsTOF等先進(jìn)質(zhì)譜儀，助力科研突破。
我們的服務(wù)：
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項(xiàng)目名稱 |
半胱氨酸翻譯后修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析 |
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樣品形式 |
純蛋白、細(xì)胞裂解液、活細(xì)胞、疾病組織、血液、細(xì)菌、植物組織 |
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硬件平臺 |
Non-contact ultrasonic cell pulverizer，ChemiDoc MP Imaging System，Orbitrap Fusion Lumos Tribrid/Orbitrap Exploris 480/Q Exactive HF-X/timsTOF Pro 2 mass spectrometer |
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項(xiàng)目周期 |
4-8周 |
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交付內(nèi)容 |
項(xiàng)目報(bào)告（包含實(shí)驗(yàn)流程，數(shù)據(jù)分析圖表，生信分析結(jié)果等） |
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價(jià)格 |
咨詢 |
代表性修飾：
| 領(lǐng)域 |
翻譯后修飾 |
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炎癥 |
衣康酸化、S-羰基化、S-亞硝基化 |
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代謝 |
衣康酸化、S-羰基化、S-琥珀?；-豆蔻?；-棕櫚?；-亞硝基化、S-過硫化 |
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傳染 |
衣康酸化 |
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神經(jīng) |
衣康酸化、S-羰基化、S-琥珀?；?、S-豆蔻?；?、S-棕櫚?；?、S-異戊二烯化（含法尼基化/香葉基香葉基化）、S-亞硝基化、S-次磺酸化、S-過硫化 |
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氧化 |
S-羰基化、S-琥珀?；?、S-次磺酸化、S-過硫化 |
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免疫 |
衣康酸化、S-羰基化、S-棕櫚?；-異戊二烯化（含法尼基化/香葉基香葉基化）、S-亞硝基化、S-次磺酸化 |
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細(xì)胞 |
S-羰基化、S-琥珀?；?、S-豆蔻?；?、S-棕櫚酰化、S-異戊二烯化（含法尼基化/香葉基香葉基化）、S-亞硝基化、S-次磺酸化、S-過硫化 |
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癌癥 |
S-棕櫚?；?、S-異戊二烯化（含法尼基化/香葉基香葉基化）、S-亞硝基化、S-次磺酸化、S-過硫化 |
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病毒與疾病 |
衣康酸化、S-羰基化、S-琥珀?；?、S-豆蔻?；?、S-棕櫚?；?、S-亞硝基化、S-次磺酸化、S-過硫化 |
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心血管 |
S-異戊二烯化（含法尼基化/香葉基香葉基化）、S-亞硝基化、S-過硫化 |
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植物 |
S-異戊二烯化（含法尼基化/香葉基香葉基化）、S-亞硝基化 |
案例展示：
1.棕櫚酰化
棕櫚?；揎検巧矬w內(nèi)一種重要的蛋白質(zhì)修飾方式，它利用16碳的棕櫚酸通過硫酯鍵與蛋白質(zhì)的半胱氨酸殘基結(jié)合，在調(diào)控蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞定位和穩(wěn)定性等方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。將細(xì)胞裂解、還原并封閉裸露的半胱氨酸后，再經(jīng)過羥胺處理與特異性的半胱氨酸探針標(biāo)記，將棕櫚酰化修飾置換，再經(jīng)過酶切、富集等步驟，確定棕櫚?；揎椢稽c(diǎn)。
棕櫚?；鞒虉D
棕櫚酰化實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)圖
2.次磺酸化
次磺酸化修飾，作為一種廣泛存在的蛋白質(zhì)修飾類型，它能夠調(diào)整蛋白質(zhì)的三維構(gòu)象穩(wěn)定性、活性表達(dá)以及與其他分子間的相互作用網(wǎng)絡(luò)，在信號傳導(dǎo)、酶活性調(diào)節(jié)、維護(hù)細(xì)胞內(nèi)部環(huán)境穩(wěn)定等過程發(fā)揮重要作用。將次磺酸化探針WYneN標(biāo)記的細(xì)胞（活細(xì)胞水平）進(jìn)行裂解，隨后經(jīng)Click反應(yīng)、富集、酶切、位點(diǎn)切割等步驟，確定WYneN探針標(biāo)記的次磺酸化修飾位點(diǎn)。
次磺酸化探針與流程圖
次磺酸化實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)圖
2.巰基化
巰基化指蛋白質(zhì)的半胱氨酸殘基上偶聯(lián)了過硫酸基團(tuán)（-SSH），此過程由硫化氫（H2S）介導(dǎo)。為了深入研究這一過程，可以從細(xì)胞或組織樣本中提取全蛋白質(zhì)組，采用化學(xué)探針標(biāo)記法（半胱氨酸特異型探針）。這種方法區(qū)別于巰基干擾，通過精確調(diào)整pH值實(shí)現(xiàn)對硫巰基的有效標(biāo)記。隨后，利用高分辨質(zhì)譜技術(shù)，研究人員能夠精確地發(fā)現(xiàn)硫巰基化的位點(diǎn)，從而進(jìn)一步揭示該翻譯后修飾在生物體內(nèi)的重要作用。
利用HeLa細(xì)胞模型，首先提取其全蛋白質(zhì)組。隨后，通過NaHS造模并調(diào)節(jié)pH值，使半胱氨酸通用探針能夠準(zhǔn)確標(biāo)記硫巰基。經(jīng)過富集、酶解和質(zhì)譜檢測等一系列步驟，鑒定到180個含有-SSH修飾的肽段，120個相關(guān)蛋白，包括已報(bào)道的巰基化位點(diǎn)， GAPDH_C152和C247。
以下展示帶有-SSH修飾的肽段二級譜圖：
